BioximiaForYou

Amylaza

Alfa-amylaza (diastaza, hydrolaza alfa-1,4-glukan-4-glukan) należy do klasy hydrolaz, które katalizują hydrolizę polisacharydów, w tym skrobi i glikogenu, do dekstryn i prostych di- i monosacharydów (maltozy, glukozy).

Amylaza w największych stężeniach występuje odpowiednio w gruczołach trzustkowych i ślinowych - w postaci izoenzymów trzustkowych i ślinowych. W warunkach fizjologicznych amylaza w surowicy składa się z 40% amylazy trzustkowej i 60% amylazy ślinowej. Stosując specyficzne inhibitory lub rozdział przez elektroforezę, możliwe jest ustalenie pochodzenia enzymu obecnego w osoczu. Amylaza jest usuwana z osocza przez nerki i wydalana z moczem. Prowadzi to do większej zawartości informacji określającej aktywność alfa-amylazy w moczu jako testu oceniającego stan funkcjonalny trzustki. Wzrost aktywności amylazy ma największe znaczenie w diagnostyce chorób trzustki.

Wartość kliniczna i diagnostyczna:

Aktywność alfa-amylazy i moczu krwi zmienia się znacznie w ciągu dnia.

Hiperamalasemia - wzrost aktywności amylazy w surowicy krwi.

Ø Ostre zapalenie trzustki - maksymalne wartości występują w pierwszych 6 - 12 godzinach po wystąpieniu objawów choroby. Po tym czasie aktywność enzymu spada, normalizuje się w ciągu 2-5 dni. Jeśli aktywność pozostaje zwiększona przez ponad 5 dni, oznacza to wzrost stanu zapalnego.

Ø Zaostrzenie w przewlekłym zapaleniu trzustki

Ø Perforacja wrzodu dwunastnicy

Ø Niedrożność jelit

Ø Ostre zapalenie wyrostka robaczkowego

Ø Alkaloidy (morfina, heroina, kodeina)

Ø Zatrucie metanolem

Ø Duże dawki etanolu (dla alkoholików)

Hipoamylemia - spadek aktywności amylazy w surowicy krwi (praktycznie nie ma wartości diagnostycznej).

Ø Martwica trzustki

Ø Zawał mięśnia sercowego

Hiperamalazuria - zwiększone wydalanie amylazy z moczem.

Ø Ostre zapalenie trzustki - wzrost aktywności enzymu obserwuje się w ciągu pierwszych 24 godzin zapalenia. Zwiększone wydalanie enzymu z moczem utrzymuje się przez następne 7 do 10 dni, mimo że aktywność amylazy we krwi po 3-4 dniach jest normalna.

Ø Rak trzustki

Ø Perforacja wrzodu dwunastnicy

Ø Choroba kamicy żółciowej

Ø Choroby gruczołów ślinowych, ślinianek, kamieni w przewodach ślinowych

Hipoamylaza - zmniejszenie uwalniania amylazy w moczu.

Ø Choroba nerek

Ø Choroba wątroby

„Oznaczanie aktywności alfa-amylazy w płynach biologicznych za pomocą jednolitej metody Karavey”

Zasada: pod działaniem alfa-amylazy skrobia jest hydrolizowana z wytworzeniem produktów, które nie dają reakcji barwnej z jodem. Intensywność spadku barwy kompleksu jodowo-skrobiowego na jednostkę czasu jest proporcjonalna do aktywności enzymu.

Badany materiał: świeża surowica, mocz.

Zestaw zawiera:

Odczynnik nr 1 - bufor

Odczynnik nr 2 - skoncentrowany substrat

Odczynnik №3 - stężony roztwór jodu

Odczynnik nr 4 - roztwór fluorku potasu

Odczynnik nr 5 - kwas solny

Przygotowanie odczynników do procedury analizy:

Roztwór roboczy substratu: wymieszać odczynniki nr 1 i nr 2 w stosunku 24: 1.

Roztwór roboczy jodu: wymieszać wodę destylowaną, odczynnik nr 3 i odczynnik nr 4 w stosunku 7: 1: 2.

Roztwór roboczy kwasu solnego: rozcieńczyć zawartość butelki nr 5 wodą destylowaną 16 razy.

Przebieg determinacji:

Odczynnik

Doświadczona próbka

Próbka kontrolna

BioXplorer

Amylaza

α-Amylaza [α - (1,4) -glukan-4-glukanohydrolaza, KF 3.2.1.1] jest enzymem, który hydrolizuje wewnętrzne wiązania 1,4 α-glikozydowe skrobi, glikogenu i innych polimerów glukozy. U ludzi głównymi źródłami α-amylazy są trzustka i gruczoły ślinowe. Liczne izoformy izolowane z płynów biologicznych i tkanek ludzkich są prawdopodobnie heterogennymi produktami zmian potranslacyjnych dwóch rodzin izoenzymów amylazy, których syntezę kodują dwa loci genu Atu-1, typu amylazy śliny (C) i Atu-2, trzustki (P) rodzaj enzymu, blisko spokrewniony w chromosomie 1. Izoenzymy C i P nie mają dużych różnic w składzie aminokwasów. Dwie izoformy wyizolowano przez filtrację żelową na Sephadex we frakcji C-amylazy, z których jedna zawiera węglowodany. Masa cząsteczkowa izoform zawierających węglowodany, 57 kDa, bez węglowodanów - 55 kDa. Punkty izoelektryczne głównych izoform C-izoamylaz od 5,5 do 6,5. Grupa p izoamylazy ma niższą masę cząsteczkową (53 kDa) i nie zawiera węglowodanów. Punkty izoelektryczne tych białek wahają się od 5,7 do 7,0.

Przekonującym dowodem na to, że amylaza typu P powstaje tylko w trzustce, jest brak tego izoenzymu u osób z całkowitą trzustką. Natomiast izoenzym C α-amylazy może być syntetyzowany w różnych narządach i tkankach. Wysoka aktywność C-amylazy jest utrwalona w tkance jajowodów i zawartości torbieli jajnika. Specyficzna grupa izoamylaz wytwarzanych przez tkanki żeńskich narządów płciowych nie jest wykrywana w surowicy lub moczu zdrowych ludzi; rozkład izoamylaz jest identyczny u mężczyzn i kobiet. Izoamylazy należące do grupy C występują także w ludzkim mleku i płynie z rany.

Znaczenie kliniczne określenia aktywności amylazy w surowicy.

Określenie aktywności α-amylazy w surowicy jest najczęstszym testem w rozpoznawaniu ostrego zapalenia trzustki. W ostrym zapaleniu trzustki aktywność enzymów w surowicy wzrasta 3–12 godzin po bolesnym ataku, osiąga maksimum po 20–30 godzinach i powraca do normy po korzystnym przebiegu w ciągu czterech dni. Aktywność α-amylazy (diastazy) w moczu wzrasta 6–10 godzin po wzroście aktywności surowicy i powraca do normy, najczęściej trzy dni po wzroście.

Obecnie powszechnie wiadomo, że wzrost ogólnej aktywności α-amylazy nie jest specyficzny dla zapalenia trzustki i innych chorób trzustki. Badania kliniczne wykazały, że wzrost aktywności α-amylazy występuje w wielu chorobach, w tym w niedrożności jelit, chorobach dróg żółciowych, zapaleniu wyrostka robaczkowego, śliniance przyusznej i ciąży pozamacicznej. Czułość i swoistość oznaczania α-amylazy w diagnozie ostrego zapalenia trzustki wzrasta wraz ze zmianami granic wartości normalnych (poziom dyskryminacji normy i patologii jest aktywnością 1,5–2 razy wyższą niż górne granice normy). W tym przypadku oznaczenie aktywności α-amylazy jest najbardziej pouczającym pierwszym dniem rozwoju ostrego zapalenia trzustki. Według niektórych autorów oznaczanie aktywności α-amylazy w surowicy w przewlekłym zapaleniu trzustki nie ma wartości diagnostycznej.

U ludzi α-amylaza, która swobodnie przechodzi przez barierę filtracyjną ciał nerkowych, ponownie wchłania komórki nabłonkowe kanalików nerkowych w taki sam sposób, jak inne białka surowicy o niskiej masie cząsteczkowej. Wzrost aktywności amylazy w surowicy może być spowodowany upośledzoną eliminacją enzymu. Przykładem jest stan zwany makroamylemią, gdy enzym wiąże się z immunoglobulinami w surowicy i tworzy kompleks makrocząsteczkowy. Taki kompleks nie jest filtrowany do moczu i nie może być usunięty za pomocą jakichkolwiek innych mechanizmów, co prowadzi do znacznego, a czasem przedłużonego wzrostu aktywności α-amylazy w surowicy krwi. Makroamylemia występuje u osób zdrowych z częstością 1% u osób z hiperamylasemią z częstotliwością 2,5%. Makroamylemię można zdiagnozować metodą ultrawirowania, ESP, chromatografii żelowej, zaproponowano także prosty test wytrącania kompleksu glikolem polietylenowym.

Aktywność α-amylazy w surowicy jest często zwiększona w niewydolności nerek, ale nie jest do końca jasne, co powoduje ten wzrost - wzrost powstawania enzymu lub zmniejszenie jego eliminacji. W takich przypadkach można podać dodatkowe informacje, określając szybkość wydalania α-amylazy lub obliczanie klirensu enzymu.

Według wielu autorów najbardziej czułym i specyficznym testem w diagnostyce zapalenia trzustki jest poziom aktywności α-amylazy P-izoenzymu. Ten test ma szczególne znaczenie, jeśli u pacjenta z przypuszczalną diagnozą zapalenia trzustki występuje normalna całkowita aktywność amylazy. Dzięki zmniejszonej aktywności P-amylazy można rozpoznać przewlekłe zapalenie trzustki. Proporcja izoamylazy P w całkowitej aktywności α-amylazy jest znacznie wyższa w moczu niż w surowicy, prawdopodobnie z powodu różnic w wydalaniu izoenzymów przez nerki. Niemniej jednak wartość diagnostyczna oznaczania aktywności izoenzymów α-amylazy w moczu jest gorsza niż we krwi.

Eksperyment - podstawowa metoda nauki
Zarówno obserwacja, jak i pomiar są zawarte w tak złożonej podstawowej metodzie nauki, jak eksperyment. W przeciwieństwie do obserwacji eksperyment charakteryzuje się interwencją badacza w pozycję badanych obiektów, poprzez aktywny wpływ na przedmiot.

Gleba jest unikalnym składnikiem biosfery
Pod koniec XIX wieku. V. Dokuchaev, wielki rosyjski naukowiec przyrodniczy, badając czarnoziemy i inne gleby Doliny Rosyjskiej i Kaukazu, ustalił, że gleby są naturalnymi ciałami w ich zewnętrznych cechach i właściwościach sił.

Analiza moczu
Analiza moczu to seria testów chemicznych i fizycznych, których wyniki pokazują ciężar właściwy i pH próbki oraz obecność i poziom krwi, glukozy i innych składników w próbce. Od podstawowych danych w przewlekłej niewydolności nerek i otrzymywać.

Amylaza

α - amylaza (diastaza, 1,4 - a - hydrolaza D - glukanowa, EC 3.2.1.1.) katalizuje hydrolizę wiązań α - 1,4 - glukozydowych skrobi, glikogenu i ich pokrewnych polisacharydów do maltozy, dekstryn i innych polimerów. Masa cząsteczkowa enzymu wynosi około 48 000 D. Cząsteczka zawiera atom wapnia, który nie tylko aktywuje enzym, ale także chroni go przed działaniem proteaz, a aktywność amylazy zwiększa się pod wpływem jonów chloru. We krwi jest ona reprezentowana przez dwa izoenzymy: trzustkowy - typ P i ślinowy - typ S, z których każdy jest podzielony na kilka frakcji. Izoenzym typu S wynosi na ogół 45–70% (średnio 57%), reszta jest typu P. Oba izoenzymy mają prawie identyczne właściwości katalityczne i immunologiczne, różnią się nieznacznie ruchliwością elektroforetyczną, ale są dobrze rozdzielone przez filtrację żelową na DEAE - Sephadex. Istnieje również makroamylaza, która nie jest wydalana przez nerki, ale można ją znaleźć w normalnej surowicy krwi (około 1% zdrowych osób) i patologii (2,5%).

Wysoka aktywność amylazy jest obserwowana w śliniance przyusznej i trzustce. Jednak jego aktywność, choć znacznie mniejsza, występuje w jelicie grubym i jelicie cienkim, mięśniach szkieletowych, wątrobie, nerkach, płucach, jajowodach, tkance tłuszczowej. We krwi enzym jest związany zarówno z białkami osocza, jak i z uformowanymi elementami. Aktywność enzymu jest taka sama dla mężczyzn i kobiet i nie zależy od charakteru spożywanego pokarmu i pory dnia.

Istniejące metody badania aktywności a-amylazy w płynach biologicznych są podzielone na dwie duże grupy:

1. Scukrzanie (reduktometryczne), oparte na badaniu cukrów powstających ze skrobi przez działanie redukujące glukozy i maltozy.

2. Amyloklastyczny, oparty na oznaczeniu pozostałości nierozszczepionej skrobi:

• w zależności od stopnia intensywności jego reakcji z jodem. Metody te są bardziej czułe i specyficzne, ale ich dokładność zależy w dużej mierze od jakości skrobi i optymalizacji warunków oznaczania.
• lepkość zawiesiny skrobi, nie mają wysokiej dokładności i nie są teraz stosowane.

3. Metody wykorzystujące substraty chromogenne –– opierają się na wykorzystaniu kompleksów substrat-barwnik, które pod wpływem α-amylazy rozpadają się tworząc rozpuszczalny w wodzie barwnik.

4. Metody oparte na sprzężonych reakcjach enzymatycznych:

Skrobia + H₂O maltozie + maltotriozie + dekstrynie

Maltoza + N₂Około 2 glukozy

Glukoza + ATP Glukoza - 6 - F + ATP

Glucose-6-F + NADF Gluconate-6-F + NADFN

Aktywność enzymu określa szybkość akumulacji NADPH.

Dwie metody amyloklastyczne zostały zatwierdzone jako ujednolicone: Karavey (z odpornym substratem skrobiowym) i Smith-Rohe.

Oznaczanie aktywności amylazy z barwionym
substrat dla firmy rekrutacyjnej „Lachema”

Zasada

α-Amylaza katalizuje hydrolizę nierozpuszczalnego barwnego substratu skrobiowego z wytworzeniem niebieskiego rozpuszczalnego w wodzie barwnika. Ilość uwolnionego barwnika jest proporcjonalna do aktywności katalitycznej enzymu.

Oznaczanie aktywności alfa-amylazy.

Alfa-amylaza (diastaza) jest enzymem, który dokonuje hydrolitycznego rozszczepienia polisacharydów na dekstryny, maltozę i glukozę. Końcowe produkty amylazy nie dają reakcji barwnej z jodem. Gruczoły trzustkowe i ślinowe są najbogatsze w amylazę. Amylaza jest wydzielana do krwi głównie z tych narządów.

Osocze ludzkiej krwi zawiera głównie dwa rodzaje amylazy: trzustki i ślinę, trzeci typ amylazy jest duży lub makroamylaza. Z moczem amylaza trzustkowa jest głównie wydalana, co jest jednym z powodów, dla których oznaczanie amylazy w moczu jest bardziej pouczające niż we krwi do oceny stanu funkcjonalnego trzustki. Uważa się, że 65% aktywności amylazy w moczu wynika z amylazy trzustkowej, podczas gdy 60% aktywności amylolitycznej w surowicy zapewnia amylaza gruczołów ślinowych. W ostrym zapaleniu trzustki amylaza trzustkowa zwiększa się w surowicy do 89%, aw moczu do 92% bez zmiany wskaźników amylazy śliny.

Aktywność amylazy we krwi i moczu ulega znacznym zmianom w ciągu dnia, a także odnotowuje różnice indywidualne. Wahania aktywności amylazy wymagają jej badania w moczu dziennym w celu oceny funkcji trzustki.

Istniejące metody określania aktywności α-amylazy dzielą się na 2 grupy:

1. Metoda punktu końcowego opiera się na oznaczeniu pozostałości niestrawionej skrobi zgodnie ze stopniem intensywności jej reakcji z jodem (metoda Karavey).

2. Metoda kinetyczna.

α-amylaza w surowicy - 16-30 g / h * l

α-amylaza moczu - 28-160 g / h * l

1. Surowica nie powinna być hemolizowana.

2. Warunki eksperymentu są bardzo ważne, w szczególności dokładny czas inkubacji wynoszący 5 minut, dlatego nie zaleca się przeprowadzania jednoczesnego badania więcej niż 5 surowic.

3. Oznaczanie aktywności α-amylazy w moczu przeprowadza się podobnie do oznaczania we krwi, jednak w przypadku hiperamylazy zaleca się rozcieńczenie moczu z późniejszym przeliczeniem.

4. Na aktywność α-amylazy mają wpływ leki - antybiotyki, środki przeciwbólowe, a także alkohol.

Wzrost aktywności amylazy występuje głównie w chorobach trzustki.

W ostrym zapaleniu trzustki aktywność enzymu we krwi i moczu wzrasta ponad 10 razy. Hiperamalasemia występuje natychmiast po wystąpieniu choroby, osiąga maksimum przez 12-24 godzin, po czym aktywność enzymu szybko zmniejsza się i dochodzi do normy przez 2-6 dni. Zwykle hypramilazuria trwa dłużej niż wzrost aktywności enzymu w surowicy, dlatego przez 2-3 dni po bolesnym ataku lepiej jest określić aktywność α-amylazy w moczu.

W przewlekłym zapaleniu trzustki, raku trzustki, wzrost aktywności enzymów nie jest tak znaczący. Ponadto może występować niewielki wzrost aktywności enzymów w chorobach, którym towarzyszy podobny obraz kliniczny z ostrym zapaleniem trzustki: ostre zapalenie wyrostka robaczkowego, zapalenie otrzewnej, perforacja wrzodu żołądka itp.

Dlatego wyraźna amylasemia pozwala na odróżnienie ostrego zapalenia trzustki od przewlekłych chorób trzustki, a także innych ostrych chorób jamy brzusznej.

Prawie zawsze amylsemii towarzyszy amylazuria. Jednak określenie aktywności amylazy w moczu jest mniej dokładnym wskaźnikiem diagnostycznym, ponieważ uwalnianie amylazy w moczu jest związane z czynnością nerek. Niewielki wzrost poziomu amylazy we krwi przy jednoczesnym zmniejszeniu jej poziomu w moczu można wyjaśnić naruszeniem funkcji wydalania nerkowego.

Spadek aktywności amylazy obserwuje się w przypadku martwicy trzustki, chorób wątroby (zapalenie wątroby, marskość wątroby), rozległych oparzeń, cukrzycy, kacheksji itp.

194.48.155.252 © studopedia.ru nie jest autorem opublikowanych materiałów. Ale zapewnia możliwość swobodnego korzystania. Czy istnieje naruszenie praw autorskich? Napisz do nas | Opinie.

Wyłącz adBlock!
i odśwież stronę (F5)
bardzo konieczne

Oznaczanie amylazy w płynach biologicznych

Amylaza we krwi i poziom tego wskaźnika jest normalny

• Czym jest ten enzym
• Metody określania
• Norma
• Przyczyny wzrostu
• Zmniejsz

Jednym z ważnych elementów analizy biochemicznej krwi jest badanie jej aktywności enzymatycznej. To determinuje stężenie różnych enzymów w osoczu, które są wytwarzane głównie przez niektóre narządy. Ten rodzaj swoistości pozwala na stosowanie ich jako kryteriów diagnostycznych dla wąskiego zakresu chorób. W tym artykule omówimy taki wskaźnik jak wskaźnik amylazy, który odnosi się do specyficznych markerów patologii trzustki.

Czym jest ten enzym

Od wielu lat bezskutecznie walczy z nadciśnieniem?

Szef Instytutu: „Będziesz zdumiony, jak łatwo leczyć nadciśnienie, przyjmując je codziennie.

Alfa-amylaza jest uważana za jeden z enzymów soku trzustkowego (trzustki), który aktywnie uczestniczy w procesie trawienia. Jest wytwarzany przez komórki zewnątrzwydzielnicze, a przez przewody wydalnicze wchodzi do dwunastnicy, gdzie jest odpowiedzialny za podział złożonych składników węglowodanowych na prostsze. Są zaangażowani w rozkład glikogenu i skrobi. Końcowym rezultatem ich działania powinna być produkcja prostej glukozy, która jest zużywana przez organizm do spłaty potrzeb energetycznych komórek.

Ale amylaza powinna płynąć wyłącznie do światła jelita. Zwykle niewielka jego ilość wchodzi do krążenia ogólnego, ponieważ każda komórka w procesie aktywności życiowej ma bezpośredni kontakt z krwią. Dopóki nie dochodzi do naruszenia integralności komórek trzustki, stężenie enzymu nie przekracza normalnych granic. Amylaza krwi ze względu na wysoką aktywność enzymatyczną, wpływając na każdą tkankę organizmu, może spowodować ich zniszczenie. Dlatego jego ilość powinna być utrzymywana na stałym poziomie.

W leczeniu nadciśnienia, nasi czytelnicy z powodzeniem wykorzystują ReCardio. Widząc popularność tego narzędzia, postanowiliśmy zwrócić na nie uwagę.
Czytaj więcej tutaj...

Metody i testy do określania aktywności amylazy we krwi

Amylaza we krwi krąży w ten sposób: enzym jest wydzielany przez gruczołowe komórki trzustki, przenika do krwi i jest przenoszony do wszystkich naczyń. W wątrobie jest częściowo neutralizowany. Ta część enzymu, która nie ma czasu na zapadnięcie się, przechodzi przez filtr nerkowy, gdzie jest skoncentrowana i wydalana z moczem. Mechanizm ten jest podstawą do określenia stężenia alfa-amylazy w różnych płynach biologicznych.

Główne analizy obejmują:

• Analiza biochemiczna w celu określenia alfa-amylazy krwi;
• Analiza biochemiczna moczu do oznaczania amylazy w moczu (analiza diastazy).

W praktyce klinicznej często stosuje się drugą metodę, ponieważ technicznie jest dużo łatwiejsza do wykonania i nie wymaga pobierania próbek krwi. Ponadto jest bardziej czuły i specyficzny. Rzeczywiście, w stabilnie dużej objętości krwi i płynu pozakomórkowego, enzym jest w stanie bardziej rozcieńczonym niż w małej ilości moczu. Dlatego aktywność amylazy w moczu jest kilkakrotnie wyższa niż w osoczu krwi.

Normalna wydajność

Oceniając wyniki analizy, należy je porównać z pewnymi standardami. Ważne jest, aby wziąć pod uwagę, że norma zakłada ocenę w niektórych jednostkach. Dlatego należy zwrócić uwagę na znaki wymienione po liczbach w kolumnie wyników analizy. Co więcej, szybkość amylazy, określona w różnych laboratoriach, może się różnić ze względu na użycie odczynników o różnej czułości. Zazwyczaj stawka jest wskazywana przez laboratorium obok wyniku.

Ogólnie przyjęte standardowe wskaźniki diastazy i alfa-amylazy w tabeli.

Biochemia, która określa aktywność amylazy we krwi, charakteryzuje się tym, że wskaźnik amylazy u kobiet i mężczyzn jest identyczny. Hormony płciowe nie mają znaczącego wpływu na ten enzym.

Przyczyny i mechanizmy zwiększania wskaźnika

Prawidłowa interpretacja wyników analiz w celu określenia stężenia amylazy w osoczu lub moczu może naprawdę pomóc w diagnozie wielu chorób. W praktyce klinicznej najczęściej spotykane są sytuacje, w których amylaza lub diastaza są podwyższone. Pokazuje to, co powstało:

• Zwiększona aktywność wydzielnicza trzustki;
• Obecność przeszkód w przewodach trzustkowych lub ich kompresja, co komplikuje odpływ soku trzustkowego zawierającego amylazę;
• Uczucie tkanki trzustkowej jest procesem traumatycznym, zapalnym, nekrotycznym (niszczącym) lub nowotworowym.

Dlatego wzrost alfa-amylazy krwi i diastazy moczu odnosi się do specyficznych markerów dla takich chorób trzustki i jej przewodów:

1. Z zaostrzeniem przewlekłego zapalenia trzustki;
2. Z ostrym zapaleniem trzustki, ogniskową martwicą trzustki (samozniszczenie tkanki gruczołu przez enzymy), naciekiem okołotrzustkowym lub w początkowych stadiach ciężkiej martwicy trzustki;
3. Rak trzustki. Wskaźnik amylazy jest w większym stopniu przekroczony, gdy guz znajduje się w głowie i ciele narządu;
4. Różne typy kamicy żółciowej z kamicą żółciową (migracja kamieni do dróg żółciowych);
5. Porażka dużego sutka dwunastnicy dwunastnicy w postaci zwężonego zapalenia brodawki, klinowanych kamieni i guzów nowotworowych.

Zwiększona aktywność amylazy w innych chorobach i stanach

Czasami musisz zmierzyć się z sytuacjami, w których nie ma oczywistych problemów z trzustką, ale wskaźniki alfa-amylazy i diastazy wykraczają poza normalny zakres. Oznacza to, że są:

• Błędy w diecie;
• Korzystanie z napojów alkoholowych;
• Zaostrzenie przewlekłego zapalenia pęcherzyka żółciowego i procesu zapalnego w wątrobie;
• Ciąża pozamaciczna;
• Choroby zapalne i destrukcyjne narządów jamy brzusznej (perforowane wrzody, zapalenie wyrostka robaczkowego, zapalenie otrzewnej, niedrożność jelit i inne);
• Zakażenia wirusowe towarzyszące poliglandulitis (wielokrotne zmiany zapalne u prawie wszystkich śliny i trzustki). Dzieje się tak przy zapaleniu ślinianki przyusznej, cytomegalii i zakażeniu wirusem Epsteina-Barra.

Zmniejsz

Rozszyfrowanie testów, których wyniki wykazały spadek aktywności amylazy we krwi, jest rzadko wymagane. Ale wciąż, czasami musisz się z tym zmierzyć. Jest to możliwe dzięki:

• Całkowite lub prawie całkowite zniszczenie trzustki w wyniku martwicy trzustki;
• Transformacja nowotworu większości trzustki, w której praktycznie nie ma normalnych komórek z zachowanymi zdolnościami funkcjonalnymi;
• Usunięcie całej lub subtotalnej resekcji trzustki;
• Genetyczne zaburzenia aktywności enzymów w organizmie (mukowiscydoza).

Poziom amylazy we krwi i diastazie moczowej jest niezawodnym sztandarowym czynnikiem wskazującym kierunek ścieżki diagnostycznej dla chorób trzustki. Prawidłowa ocena testów w połączeniu z porównaniem wyników innych rodzajów badań pozostawia niewielką szansę na niezauważenie wielu chorób.

Wartość kliniczna i diagnostyczna oznaczania aktywności alfa-amylazy

W krwi i moczu

Aktywność alfa-amylazy krwi i moczu w ciągu dnia (a także z dnia na dzień) znacznie się różni. Ponadto zaobserwowano znaczące różnice indywidualne tych wskaźników u pacjentów bez patologii narządów trawiennych. Biorąc pod uwagę wahania wydalania alfa-amylazy w moczu, zaleca się zbadanie aktywności enzymu w moczu zebranym dziennie.

Zmiany aktywności alfa-amylazy we krwi i moczu występują podczas ciąży. Hyperamalasemia. Aktywność alfa-amylazy znacznie wzrasta wraz z chorobami trzustki. W ostrym zapaleniu trzustki aktywność enzymu we krwi i moczu wzrasta 10-40 razy. Hiperamylemia występuje na początku choroby, osiąga maksimum 12-24 godzin po rozwoju, a następnie szybko spada i osiąga normę o 2-6 dni.

Aktywność enzymu może być zwiększona w wielu chorobach o podobnym obrazie klinicznym z ostrym zapaleniem trzustki, a mianowicie: ostrym zapaleniem wyrostka robaczkowego, zapaleniem otrzewnej i perforacją wrzodu żołądka i dwunastnicy. U pacjentów z zapaleniem otrzewnej wzrost aktywności amylazy jest konsekwencją rozwoju bakterii tworzących amylazę. Zwykle aktywność enzymu w tych stanach patologicznych wzrasta o 3-5 razy.

Choroby, które powodują stosunkowo niewielką hiperamylasemię pochodzenia nie trzustkowego (tj. Bez bezpośredniego wpływu na samą trzustkę) obejmują zapalenie pęcherzyka żółciowego, kamicę żółciową, stan związany z pęknięciem pęcherzyka żółciowego, chorobę nerek, niewydolność nerek, przerzuty nowotworu nowotworowego w płucach i uszkodzenie gruczołów ślinowych. z obturacją przewodów (wyraźny obraz kliniczny ślinianki ułatwia wyjaśnienie hiperamylasemii), zapalenia gruczołu krokowego, urazowego uszkodzenia mózgu, wstrząsu pourazowego, oparzeń, zapalenie płuc, cukrzycowa kwasica ketonowa, aborcja, okres pooperacyjny.

Aktywność alfa-amylazy w surowicy wzrasta również w przypadku perforacji przełyku, wrzodu żołądka, zapalenia żołądka, ostrej niedrożności jelit, niedokrwienia i zawału jelita cienkiego, zapalenia otrzewnej, pęknięcia rurki podczas ciąży pozamacicznej, zapalenia jajowodu, tętniaka aorty.

Głównymi przyczynami hiperamylasemii są: upośledzony wypływ wydzieliny z gruczołów (producenci alfa-amylazy), zwiększona przepuszczalność bariery histohematogennej w gruczołach, martwica tkanek, upośledzone uwalnianie enzymów przez filtr nerkowy.

Niektóre inne hormony i wiele leków farmakologicznych, głównie środki prowadzące do zmniejszenia zwieracza Oddiego, powodują adrenalinę: adrenalinę, histaminę, sekretinę, furosemid, salicylany, antykoagulanty, morfinę, pantopon, opium, kodeinę, tetracyklinę, a także alkohol.

Pomimo faktu, że hiperamylasemii prawie zawsze towarzyszy peramylazuria, oznaczenie aktywności alfa-amylazy w moczu nie zawsze może być dokładnym wskaźnikiem diagnostycznym, ponieważ uwalnianie amylazy do moczu jest związane z czynnością nerek. Ponadto nerki wydalają tylko 24% amylazy wydzielanej przez gruczoły trawienne z krwi.

Badanie aktywności alfa-amylazy w codziennym moczu jest bardziej wiarygodnym testem biochemicznym do wykrywania choroby trzustki niż badanie oparte na analizie pojedynczej jego części. Po aktywacji alfa-amylazy we krwi po ataku zapalenia trzustki powraca do normy, może pozostać podwyższona w moczu do 7 dni.

Współczynnik „aktywność alfa-amylazy we krwi / aktywność alfa-amylazy w moczu” jest wskaźnikiem użyteczności filtra nerkowego.

Hipoamylamina w praktyce klinicznej jest rzadka. Obserwuje się ją u pacjentów z chorobami wątroby (zapalenie wątroby, marskość wątroby), nowotworami złośliwymi (zwłaszcza w obecności przerzutów w wątrobie), rozległymi oparzeniami, skórą, cukrzycą, niedoczynnością tarczycy, częstymi zaburzeniami odżywiania, utratą masy ciała, kacheksją, a także pod wpływem intoksykacji ( na przykład w przypadku zatrucia u kobiet w ciąży). Zmniejszenie aktywności alfa-amylazy najczęściej wskazuje na niewydolność zewnątrzwydzielniczej funkcji gruczołu podżołądkowego. Wprowadzenie cytrynianów i szczawianów prowadzi do zmniejszenia aktywności enzymów.

Oznaczanie całkowitej aktywności dehydrogenazy mleczanowej

Dehydrogenaza mleczanowa (L-mleczan; oksydoreduktaza NAD, EC 1.1.1.27) jest glikolitycznym (cytozolowym cynkiem zawierającym enzym) enzymem (masa cząsteczkowa 135 000 D), który odwracalnie katalizuje utlenianie L-mleczanu do kwasu pirogronowego. Niezbędnym uczestnikiem tej reakcji jest utleniony dinukleotyd nikotyny i adeniny, stosowany jako kofaktor enzymu, który pełni rolę akceptora wodoru.

Reakcję katalizowaną przez dehydrogenazę mleczanową można przedstawić następująco:

SNSNONSOO "+ OVER + Dehydrogenaza mleczanowa SNSSOSOO '+ OVER • H + H +

Enzym jest szeroko rozpowszechniony u ludzi. W zależności od stopnia zmniejszenia aktywności enzymów, narządy i tkanki można układać w następującej kolejności: nerki, serce, mięśnie szkieletowe, trzustka, śledziona, wątroba, płuca, surowica krwi. W tym ostatnim stwierdzono kilka różnych białek (izoenzymów), które posiadają właściwości katalityczne tego enzymu. Zmiany w strukturze części białkowej izoenzymów określają ich różne właściwości fizykochemiczne (w szczególności różną ruchliwość elektroforetyczną w agarze, skrobi, poliakrylamidach i innych żelach).

W osoczu (surowicy) krwi zidentyfikowano pięć izoenzymów dehydrogeazy mleczanowej - LDG1, LDG2, LDGz, LDG4, LDG5 - które znajdują się w żelu w malejącej kolejności ich ruchliwości elektroforetycznej.

Każdy z izoenzymów jest tetramerem utworzonym przez podjednostki H i M. Ustalono, że frakcja LDH1 pochodzi głównie z tkanki serca, LDH5 - z wątroby. LDH w cytoplazmie komórek i surowicy reprezentuje 5 izoenzymów.

Podjednostka M znajduje się głównie w tkankach z metabolizmem beztlenowym, podczas gdy podjednostka H jest obecna w tkankach z przewagą procesów tlenowych. Metoda elektroforezy na nośnikach pomaga podzielić wszystkie 5 izoenzymów LDH, które reprezentują następujący procent w surowicy krwi zdrowych ludzi: LDH; (14–26%), LDH ^ (29–39%), LDH (20–26%), LDH4 (8–16%), LDH (6–16%) - V.N. Titov i in. (1988).

Dehydrogenaza mleczanowa zawarta jest nie tylko w osoczu, ale także w znacznych ilościach w krwinkach czerwonych, więc surowica użyta do analizy musi być świeża, bez hemolizy.

Metody określania całkowitej aktywności LDH dzielą się na dwie główne grupy: 1) kinetyczna, oparta na teście Warbara-optycznego (efekt optyczny związany z konwersją NAD na NAD • N i odwrotnie) oraz 2) metody, które określają ilość wytworzonego produktu lub zużyty substrat po ustalonym okresie inkubacji (metody punktu końcowego).

Praca nr 32 Kolorymetryczna metoda dinitrofenylohydrazyny do oznaczania aktywności dehydrogenazy mleczanowej w surowicy krwi (według Sevela i Tovarka)

Zasada metody. L-mleczan w pożywce alkalicznej w obecności LDH w surowicy i dodany NAD utlenia się do pirogronianu. W zależności od stopnia jej powstawania i oceniano na podstawie aktywności enzymu.

Odczynniki

1. 0,45 mol / l roztwór sodu kwasu mlekowego. W kolbie miarowej o pojemności 100 ml dodać 5 ml kwasu mlekowego w stężeniu 800 g / l i 10 ml kwasu mlekowego w stężeniu 400 g / l i zneutralizować 2N roztworem wodorotlenku sodu do słabo alkalicznej reakcji o pH 7,5 (przy użyciu fenoloftaleiny należy rozwinąć słabość różowy kolor). Objętości są sprowadzane do wody destylowanej.

2. 0,03 mol / l roztwór pirofosforanu sodu, pH 8,8. W kolbie miarowej o pojemności 500 ml wnoszą 6,69 g Na₂ R₂O₅ • N₂Około 50 ml diet rozcieńczonej wody, mieszaninę dokładnie miesza się i pH roztworu doprowadza się do 8,8 za pomocą 1N roztworu HCl. Objętość zawartości kolby dostosowuje się do kreski wodą destylowaną. Odczynnik jest stabilny przez jeden miesiąc, gdy jest przechowywany w lodówce.

3. Rozwiązanie NAD. 3 mg NAD (chemicznie czysty) rozpuszcza się w 1 ml wody destylowanej (w ilości 0,6 mg na próbkę). Odczynnik jest stabilny przez 4 tygodnie, gdy jest przechowywany w lodówce.

4. Roztwór 2,4-dinitrofenylohydrazyny. 19,8 mg 2,4-dinitrofenylohydrazyny rozpuszcza się w małej objętości 1N roztworu kwasu chlorowodorowego przez ogrzewanie mieszaniny w łaźni wodnej. Po ochłodzeniu objętość doprowadza się do 1 ml 1N kwasem solnym. Następnego dnia odczynnik jest filtrowany. Roztwór jest przechowywany w naczyniu z ciemnego szkła, można go używać przez rok.

5. 0,4 n roztwór wodorotlenku sodu.

6. 1 n roztwór kwasu solnego.

7. Standardowy roztwór sodu pirogronowego. 11 mg krystalicznego kwasu pirogronowego sodu rozpuszcza się w małej ilości wody destylowanej, przenosi do 100 ml kolby miarowej i objętość roztworu uzupełnia się wodą destylowaną do kreski. 1 ml roztworu zawiera 110 µg pirogronianu sodu, co odpowiada 88 µg kwasu pirogronowego. Roboczy roztwór wzorcowy przygotowuje się rozcieńczając główny 10 razy wodą destylowaną. W 1 ml roztworu roboczego 8,8 μg kwasu pirogronowego.

Przebieg determinacji. 0,1 ml surowicy rozcieńczonej 1: 2 miesza się z 0,3 ml roztworu NAD i ogrzewa przez 5 minut w temperaturze 37 ° C. Następnie 0,8 ml roztworu do ogrzewania kwasu fosforowego i 0,2 ml roztworu kwasu mlekowego sodu, uprzednio ogrzanego do 37 ° C Mieszaninę inkubuje się w 37 ° C przez 15 minut Po inkubacji próbkę napełnia się 0,5 ml 2,4-dinitofenylohydrazyny i utrzymuje w temperaturze pokojowej przez 20 minut. Następnie dodać 5 ml roztworu wodorotlenku sodu, wymieszać zawartość probówki i po 10 minutach

Absorpcję mierzy się w zakresie długości fali 500-560 nm, na przykład w PEC z filtrem z zielonym światłem w kuwecie o grubości warstwy 10 mm. Zapisać gęstość optyczną próbki, uwzględniając kontrolę absorpcji.

Próbkę kontrolną umieszcza się w taki sam sposób jak eksperymentalną, ale rozcieńczoną surowicę 1: 2 dodaje się po inkubacji mieszaniny. Oblicz aktywność enzymu zgodnie z wykresem kalibracji. Aktywność dehydrogenazy mleczanowej wyraża się w mmol kwasu pirogronowego, który tworzy się przez inkubację 1 l surowicy przez 1 hw 37 ° C.

Aby uzyskać dane do zbudowania wykresu kalibracji, należy wykonać następujące czynności. Z roboczego roztworu standardowego kwasu pirogronowego sodu przygotować serię rozcieńczeń (Tabela 2). Następnie wlać 0,5 ml roztworu 2,4-dinitrofenylohydrazyny do probówek. Następnie przetwarzaj standardowe próbki w taki sam sposób jak doświadczone.

Po umieszczeniu próbki kontrolnej dodać do probówki 0,6 ml wody destylowanej, 0,8 ml roztworu pirofosforanu i 0,5 ml roztworu 2,4-dinitrofenylohydrazyny. Następnie próbka jest traktowana podobnie.

Aby znaleźć wskaźniki aktywności dehydrogenazy mleczanowej w wymiarze „mmol kwasu pirogronowego na 1 litr surowicy na 1 godzinę inkubacji w 37 ° C”, liczbę μmol kwasu pirogronowego w próbce standardowej mnoży się przez współczynnik 120 lub ilość μg kwasu pirogronowego - o 1,41.

Aby wyrazić aktywność enzymu w jednostkach nowego wymiaru, możesz zastosować inną formułę:

Aktywność dehydrogenazy mleczanowej w mmol / (h • l) = C • 120: 88,

gdzie C oznacza ilość μg kwasu pirogronowego w próbce, 120 oznacza współczynnik konwersji μg kwasu pirogronowego w mg, 88 jest współczynnikiem do konwersji wskaźników z mg na mmol.

Podczas konstruowania wykresu kalibracji na osi odciętych, wartości aktywności enzymu są wyrażane, wyrażone w wymiarach, mmol DCH • l) i przedstawione w ostatniej kolumnie tabeli 33. Relacja między linią stężenia kwasu pirogronowego a gęstością optyczną wynosi od 0 do 10 mmol / (h • l).

Wartość kliniczna i diagnostyczna oznaczania aktywności amylazy

Amylaza jest enzymem, który rozkłada skrobię i glikogen. trzustka i gruczoły ślinowe są najbogatsze. Zawartość amylazy w surowicy jest związana z przyjmowaniem pokarmu: w ciągu dnia aktywność jest wyższa niż w nocy.

Aktywność amylazy w surowicy wzrasta (hiperamylasemia) z:

Ostre zapalenie trzustki (10-30 razy, dochodzące do normy przez 6-7 dni, jeśli aktywność pozostaje zwiększona przez ponad 5 dni, wskazuje to na rozwój przewlekłego procesu);

Zaostrzenie przewlekłego zapalenia trzustki;

Zapalenie ślinianki (zapalenie gruczołów ślinowych);

Może być spowodowane przez alkohol, adrenalinę, narkotyki.

Spadek aktywności amylazy w surowicy (hipoamylemia) obserwuje się, gdy:

Choroby wątroby (zapalenie wątroby, żółtaczka obturacyjna, marskość wątroby);

Zwiększoną aktywność moczu (hiperamylazę) obserwuje się, gdy:

Ostre zapalenie trzustki (ma większą wartość diagnostyczną niż definicja w surowicy, ponieważ trwa dłużej niż 7 dni);

Spadek aktywności enzymu w moczu (hipoamylaza) obserwuje się, gdy:

Odpowiedz na pytania:

Nazwij miejsce lokalizacji, optymalne pH i wartość biologiczną amylazy.

Napisz reakcję, że amylaza katalizuje.

Jaka klasa enzymów amylazy?

* Jakie są główne choroby charakteryzujące się zwiększoną aktywnością amylazy. Wyjaśnij przyczynę.

* Opowiedz nam o przyczynach, rodzajach, diagnostyce laboratoryjnej i profilaktyce zapalenia trzustki.

3.8. Praktyczna praca „Oznaczanie aktywności aminotransferazy w surowicy”.

Cele pracy praktycznej:

badanie klinicznej i diagnostycznej wartości określania aminotransferaz w surowicy;

nauczyć się określać aktywność aminotransferaz w surowicy.

Zadania niezależnej pracy:

Napisz w notatniku zasadę i metodologię praktycznej pracy.

Wyposaż miejsce pracy do pracy praktycznej.

Wykonuj praktyczną pracę.

Dokonaj niezbędnych obliczeń.

Wypełnij formularz analizy. Oceń wyniki.

Podsumuj pracę i rysunki.

Odpowiedz na dodatkowe pytania.

W wyniku transaminacji, która zachodzi pod działaniem AsAT i AlAT, powstają kwasy szczawiooctowe i pirogronowe. Gdy dodaje się roztwór 2,4-dinitrofenylohydrazyny, zatrzymuje się proces enzymatyczny i pojawiają się hydrazony kwasu pirogronowego. W środowisku alkalicznym dają barwienie, którego intensywność jest proporcjonalna do ilości utworzonego kwasu pirogronowego.

1. Roztwór odniesienia sodu pirogronowego - 2 mmol / l.

2. 2,4-dinitrofenylohydrazyna - 1 mmol / l.

3. Wodorotlenek sodu - 0,4 n..

4. Podłoże AsAT / AlAT.

2. FEC, kuwety na cm.

4. Stojak na probówki.

5. Pipety do 1 i 5 ml.

Przeprowadzić badanie aktywności aminotransferaz w surowicy zgodnie z tabelą.

Wartość diagnostyczna oznaczania aktywności amylazy w surowicy

U ludzi alfa-amylaza jest wydzielana przez trzustkę i gruczoły ślinowe, jej niewielka aktywność występuje w tkankach wątroby i mięśni szkieletowych. Masa cząsteczkowa alfa-amylazy jest stosunkowo niska, w przeciwieństwie do większości enzymów jest ona filtrowana w kłębuszkach nerkowych i jest zawarta w moczu. Alfa-amylaza składa się z dwóch izoenzymów: typu trzustkowego (typ P) i śliny (typu S). U zdrowych osób surowica odpowiada za około 70% aktywności amylolitycznej w izoenzymie śliny, w moczu mniej więcej taki sam odsetek stanowi izoamylaza trzustkowa.

Hiperamilasemia i hiperamalazuria są obserwowane w wielu chorobach, ale są najbardziej widoczne w ostrym zapaleniu trzustki, w którym aktywność wzrasta głównie (do 90% lub więcej) z powodu izoenzymu trzustki. W przypadku tej choroby największą ilość amylazy we krwi i moczu odnotowano w ciągu pierwszych 1-3 dni. Wirusowe zapalenie wątroby i rak trzustki powodują również hiperamilazurię trzustkową pochodzenia trzustkowego.

Przez hiperamylasemię bez trzustki, obejmuje uszkodzenie gruczołów ślinowych, niewydolność nerek. Powodem wzrostu ilości b-amylazy we krwi są zaburzenia wydzielania gruczołów zawierających b-amylazę, niedobór wydalania amylazy przez nerki z organizmu.

Wiele substancji farmakologicznych, kortykosteroidy, salicylany, tetracyklina, furosemid, histamina powodują hiperamalasemię. Dla b-amylazy krew charakteryzuje się szerokimi zmianami wewnątrz- i międzyosobniczymi. Najbardziej pouczająca jest definicja izoamylazy trzustkowej.

Zmiana aktywności alfa-amylazy w patologii.

Określenie aktywności alfa-amylazy nabiera wartości klinicznej i diagnostycznej w diagnostyce i monitorowaniu chorób trzustki, układu pokarmowego, uszkodzeń narządów jamy brzusznej. W niektórych przypadkach (na przykład w chorobach trzustki) aktywność tylko jednego izoenzymu, alfa-amylazy trzustkowej, ma znaczenie diagnostyczne; podczas monitorowania chorób przewodu pokarmowego konieczne jest porównanie aktywności enzymu w surowicy (aktywność wydzielnicza i dodatkowa absorpcja z jamy brzusznej) i moczu (często stopień amylazurii jest bardziej stabilny i długotrwały wskaźnik niż amylasemia).

Podwyższone wartości aktywności alfa-amylazy obserwuje się dla:

Zapalne choroby trzustki (ostre, obrzęknięte, przewlekłe, reaktywne zapalenie trzustki). Hiperamylemia jest zwykle ostra (10-40 razy wyższa), ale często krótkotrwała, hiperamylaza jest również znacząca, ale poziom alfa-amylazy w moczu zmniejsza się znacznie wolniej niż w osoczu krwi (surowicy). Ta właściwość jest wygodna w użyciu, gdy „późne” badanie diagnostyczne pacjenta z klinicznymi objawami zapalenia trzustki, jednak w celu monitorowania przebiegu procesu aktywność enzymu jest zwykle mierzona w obu płynach biologicznych. Należy zauważyć, że ciężkim postaciom uszkodzeń trzustki z zagrożeniem martwicy tkanek, a także zapaleniem trzustki, którym towarzyszą poważne zaburzenia metabolizmu lipidów, może towarzyszyć spadek aktywności enzymatycznej rzeczywisty lub fałszywy (z powodu hamowania amylazy przez triacyloglicerydy). Dlatego, jeśli podejrzewa się jakąkolwiek formę zapalenia trzustki, diagnostyczne znaczenie ma nie tylko określenie aktywności alfa-amylazy w moczu i surowicy, ale także obliczenie klirensu amylazo-kreatyniny według wzoru:

W ostrym zapaleniu trzustki ta obliczona wartość przekracza 6%. Obliczanie luzu pozwala nie korygować objętości i czasu zbierania moczu i sprawia, że ​​wynik jest mniej zależny od stosowanych metod oznaczania.

Choroby jamy brzusznej, z podobnymi objawami z ostrym zapaleniem trzustki: ostre zapalenie wyrostka robaczkowego, zapalenie otrzewnej, perforowane wrzody żołądka i wrzód dwunastnicy. Aktywność alfa-amylazy zwiększa się o około 3-5, rzadko 10 razy, główną przyczyną hipememiiii jest nie tyle zwiększone wydzielanie enzymu, co jego wtórna absorpcja z narządów jamy brzusznej do krwi. Aby odróżnić diagnozę, wykonuje się oznaczenie alfa-amylazy i kreatyniny w moczu oraz obliczanie klirensu kreatyniny przy użyciu powyższego wzoru. Przy stałej wartości klirensu od 1 do 4% należy podejrzewać choroby narządów jamy brzusznej, podszywając się pod ostre zapalenie trzustki.

Z tego samego powodu aktywność alfa-amylazy znacznie wzrasta wraz z perforacją przełyku, zapaleniem żołądka, ostrą niedrożnością jelit, niedokrwieniem i zawałem jelita cienkiego, pęknięciem jajowodów, zapaleniem jajowodu, tętniakiem aorty.

W chorobach narządów wewnętrznych, które nie są bezpośrednio związane z układem trawiennym, możliwy jest umiarkowany wzrost aktywności całkowitej alfa-amylazy i / lub jej izoenzymów. Takie choroby obejmują: zapalenie pęcherzyka żółciowego, kamicę żółciową, uszkodzenie miąższu nerek i choroby zapalne tego narządu, niewydolność nerek, zapalenie gruczołu krokowego, cukrzycową kwasicę ketonową, przerzuty nowotworów złośliwych w tkankach i narządach (zwłaszcza w płucach, trzustce, okrężnicy poprzecznej). Jeśli podejrzewa się opisane powyżej patologie, przeprowadza się analizę porównawczą alfa-amylazy całkowitej i trzustkowej, ponieważ choroby izoenzymu zwiększają się głównie w opisanych chorobach (onkologiczne uszkodzenie trzustki i okrężnica poprzeczna zwiększa aktywność zarówno izoenzymów P, jak i S, co umożliwia rozróżnienie od chorób zapalnych tych samych narządów).

Hiperamalasemia pochodzenia nie-trzustkowego występuje również w chorobach gruczołów ślinowych i pewnych patologiach mózgu. W tym przypadku, wzrost całkowitej aktywności alfa-amylazy występuje również ze względu na wzrost aktywności izoenzymu śliny i aby różnicować diagnozę, należy wykonać równoległy pomiar alfa-amylazy całkowitej i trzustkowej (przy normalnej aktywności P-amylazy, można podejrzewać wyżej wspomnianą patologię).

Analiza porównawcza aktywności alfa-amylazy w moczu i surowicy jest również cennym parametrem diagnostycznym w ocenie patologii nerek. Gdy filtracja nerkowa jest upośledzona (w zespole nerczycowym, kłębuszkowym zapaleniu nerek itp.), Aktywność alfa-amylazy w moczu jest gwałtownie zmniejszona, podczas gdy umiarkowana lub znacząca hiperamlazemia występuje we krwi, dlatego współczynnik amylazy / amylazy w surowicy jest jednym z głównych parametrów diagnostycznych z tą patologią.

Stany pooperacyjne (ogólnoustrojowa odpowiedź zapalna na operację, rozwój ARDS itp.) Mogą również powodować umiarkowaną hiperamylasemię.

Zmniejszenie aktywności alfa-amylazy zwykle towarzyszy zmniejszeniu czynności funkcjonalnej trzustki, spowodowanej uszkodzeniem miąższu narządu i / lub zaburzeniem regulacji zewnątrzwydzielniczej, i najczęściej występuje, gdy:

Zmiany martwicze w trzustce związane z krwotocznym zapaleniem trzustki i całkowitą martwicą trzustki.

Z chorobami wątroby (zapalenie wątroby, marskość). Nowotwory złośliwe, zwłaszcza w przerzutach do wątroby.

Ciężkie zaburzenia równowagi hormonalnej: niedoczynność tarczycy, cukrzyca, hiperlipemia (zwłaszcza z nadmiarem triacyloglicerydów, z powodu hamowania centrum aktywnego enzymu), z ogólnym zaburzeniem odżywiania, kacheksją i toksykozą u kobiet w ciąży.

W niektórych przypadkach, z opisanymi powyżej patologiami, aktywność alfa-amylazy w surowicy może nie zmniejszać się, ale pozostaje niezmieniona.

Główne zależności w diagnostyce różnicowej patologii z podobnymi objawami.

Najczęściej stosowanymi wskaźnikami są:

Składnik całkowitej alfa-amylazy / trzustki. Stosowany w diagnostyce różnicowej procesów zapalnych i złośliwych narządów jamy brzusznej i niektórych innych tkanek. W procesach zapalnych, które nie wpływają na trzustkę, głównym źródłem aktywności całkowitej alfa-amylazy jest enzym śliny, a więc stosunek „Całkowita amylaza / izoforma trzustki”> 1. W złośliwych uszkodzeniach narządów jamy brzusznej udział obu izoenzymów jest w przybliżeniu taki sam, a współczynnik ten jest w przybliżeniu równy 1 8-2.4. Dzięki zaangażowaniu trzustki w proces zapalny lub obecności w niej przerzutów nowotworowych stosunek aktywności amylazy całkowitej i trzustkowej nie przekracza 1,5.

Całkowita alfa-amylaza / kreatynina w moczu i surowicy. Zastosowano obliczony klirens (wzór podany w ust. 3), umożliwiający różnicowanie procesu zapalnego w trzustce (stosunek przekracza 6%) i narządy jamy brzusznej (1-4%).

Całkowita alfa-amylaza w surowicy / całkowita alfa-amylaza w moczu. Stosowany do oceny aktywności funkcjonalnej filtra nerkowego. W zespole nerczycowym i zapaleniu kłębuszków nerkowych współczynnik jest wyższy niż 2–2,5.

Całkowita alfa-amylaza w surowicy / trójglicerydy w surowicy. Stosunek jest „odwrotny”, ponieważ nadmiar triacyloglicerydów może hamować aktywność alfa-amylazy. Pozwala odróżnić patologiczny spadek produkcji enzymu od zakłóceń hiperipmii.

Całkowita alfa-amylaza w surowicy / lipaza trzustkowa. Biologiczne i diagnostyczne znaczenie współczynnika jest podobne do poprzedniego stosunku, ponieważ obecność wolnych triacyloglicerydów w surowicy jest bezpośrednio związana z aktywnością lipazy trzustkowej. Proporcja jest bezpośrednia.

Zmiany aktywności alfa-amylazy u zdrowych ludzi. Ingerencja w narkotyki.

Aktywność alfa-amylazy w osoczu krwi zdrowych ludzi zasadniczo zależy od charakteru diety i pokarmów, które przeważają w diecie. Ponadto parametr ten silnie zależy od intensywności procesów metabolicznych u danej osoby, a także od aktywności mózgu pacjenta. Dlatego aktywność enzymu u tego samego osobnika w różnych czasach (nawet w tym samym dniu) może zmieniać się w zakresie 25-50% w obu kierunkach.

Hiperamylemia u zdrowych ludzi może być spowodowana stanem emocjonalnym (stres, zwiększona aktywność umysłowa), piciem (nawet raz) alkoholu, a także jest związana z dietą bogatą w białko i ubogą w węglowodany i cukry. Hipoamylemia występuje wraz ze wzrostem wykorzystania glukozy, na czczo, aktywnym ćwiczeniu, a także u osób z hiperlipidemią, nawet przy braku objawów klinicznych.

W ciąży przez okres do 19 tygodni aktywność alfa-amylazy jest obniżona w porównaniu z normą, w zakresie do 33-34 tygodni ciąży, poziom aktywności wzrasta, aw 37-40 tygodni stabilizuje się na poziomie 10-20% wyższym niż aktywność enzymu u zdrowych kobiet nie będących w ciąży.

Na aktywność alfa-amylazy i jej izoenzymu trzustkowego istotny wpływ ma również stosowanie wielu powszechnych leków stosowanych przez praktycznie zdrowych ludzi w przypadku przejściowych chorób zakaźnych i zapalnych - na przykład antybiotyki tetracyklinowe, furosemid, leki przeciwzapalne kortykosteroidowe, salicylany.

Znaczący wpływ na aktywność alfa-amylazy mają również leki, które prowadzą do zmniejszenia zwieracza Oddiego, w tym hormonów (adrenaliny, histaminy, sekretyny), substancji narkotycznych (morfina, pantopon, opium, kodeina) i innych leków, które zwiększają wydzielanie enzymu i tłumią odpływ wydzieliny z trzustki.

Na podstawie biofile.ru

Zasada metody: Maltotriozyd związany z chromogenem 2-chloro-p-nitrofenol stosuje się jako substrat dla α-amylazy. Pod działaniem a-amylazy substrat jest hydrolizowany w celu uwolnienia barwnego 2-chloro-p-nitrofenolu, maltotriozy i glukozy. Reakcja przebiega szybko i nie wymaga obecności koenzymów w mieszaninie reakcyjnej. Szybkość hydrolizy substratu jest wprost proporcjonalna do aktywności a-amylazy w próbce i jest mierzona spektrofotometrycznie przy długości fali 405 nm.

Substrat-CNF ————> CNF + Glukoza + Maltotrioza

Liniowość metody: do 1500 U / l.

a-Amylaza w niezhemolizowanej surowicy pozostaje stabilna w temperaturze pokojowej (18-25 ° C) przez 7 dni, w temperaturze przechowywania 2-8 ° C przez 2 miesiące.

1) spektrofotometr z kuwetą o kontrolowanej temperaturze, długość fali 405 nm, długość ścieżki optycznej 1 cm; temperatura reakcji 37 ° C;

3) pipety automatyczne na 25 μl i 1000 μl;

Płyn śliny może być również stosowany jako źródło enzymu (ślina jest wcześniej rozcieńczana wodą destylowaną 100 razy), ale zakres normy znacznie się różni.

6) Odczynnik roboczy (substrat - 1,8 mmol / lw buforze MES (pH 6,0 ± 0,1)).

Odczynnik roboczy nadaje się do użycia, jeśli jego gęstość optyczna nie jest większa niż 0,6 jednostki gęstości optycznej. przy długości fali 405 nm i nie ma zmętnienia.

Przed analizą odczynniki należy ogrzać do temperatury pomiaru (37 ° C).

Wymieszaj zawartość probówki i włącz stoper. Zmierz gęstość optyczną próbki względem wody destylowanej o długości 405 nm dokładnie w ciągu 1 minuty. Powtórz pomiar 3 razy w odstępie 1 minuty. Oblicz zmianę gęstości optycznej na minutę, a następnie oblicz średni pomiar gęstości optycznej na minutę (Dop / min).

Obliczanie aktywności czynnika a-amylazy według wzoru:

gdzie Dop / min jest średnią zmianą gęstości optycznej na minutę;

1,025 - całkowita objętość roztworu w kuwecie;

1000 to współczynnik konwersji ml do l;

12,9 - milimolarny współczynnik absorpcji 2-chloro-p-nitrofenolu;

0,025 to objętość surowicy w ml;

1,0 to długość ścieżki optycznej.

Dokonując jakichkolwiek zmian w wymienionych parametrach, współczynnik należy ponownie obliczyć. Jeśli aktywność a-amylazy przekracza 1500 U / l (punkt poza liniowością wykresu kalibracji), analizowaną surowicę należy rozcieńczyć 1: 1 roztworem soli fizjologicznej i powtórzyć pomiar, a wynik obliczenia pomnożyć przez 2.

Wartość kliniczna i diagnostyczna: a-amylaza jest endohydrolazą, aw organizmie człowieka jest reprezentowana przez kilka izoenzymów: enzym jest wydzielany przez gruczoły ślinowe (typ S), trzustka (typ P); mała aktywność enzymu występuje w wątrobie, mięśniach szkieletowych, płynie łzowym, wydzielaniu gruczołów sutkowych i różnych guzach.

Aktywność a-amylazy w surowicy wzrasta znacząco dzięki izoenzymowi P w różnych chorobach trzustki (zapalenie trzustki, ropień, uraz, rak).

Wraz z urazami gruczołów ślinowych (rak gruczołu ślinowego, endemiczne zapalenie ślinianki, makroamylasemia), aktywność a-amylazy w surowicy również wzrasta, ale kosztem S-izoenzymu.

Oba izoenzymy a-amylazy mają małą masę cząsteczkową (45 000), więc są filtrowane w nerkach i wydalane z moczem. Wzrost aktywności amylazy moczu (diastazy) w ostrym zapaleniu trzustki występuje 6-10 godzin później niż w surowicy krwi.

Na podstawie biohimist.ru

Zasada metody. Alfa-amylaza katalizuje hydrolizę nierozpuszczalnego barwnego substratu skrobiowego z wytworzeniem niebieskiego rozpuszczalnego w wodzie barwnika. Ilość uwolnionego barwnika jest proporcjonalna do aktywności enzymu.

Przebieg determinacji. W celu określenia aktywności alfa-amylazy w surowicy lub moczu przygotowuje się równolegle próbki doświadczalne i kontrolne i analizuje w następującej kolejności:

Próbki miesza się, pozostawia na 15 minut, odwirowuje przy 3000 obr / min przez 5 minut. Następnie zmierzyć gęstość optyczną próbki doświadczalnej względem kontroli w FEC przy długości fali 590 nm w kuwetach o grubości warstwy 5,0 mm.

Aktywność enzymu znajduje się w harmonogramie kalibracji.

Kliniczna i diagnostyczna wartość określania aktywności alfa-amylazy w surowicy i moczu: u ludzi alfa-amylaza jest wydzielana przez trzustkę i gruczoły ślinowe, jej mała aktywność występuje w tkance wątroby i mięśniach szkieletowych. Masa cząsteczkowa enzymu jest stosunkowo niska („48 000”), więc jest filtrowana w kłębuszkach nerkowych i jest zawarta w moczu.

U zdrowych osób aktywność enzymów w surowicy wynosi od 140 do 350 U / l, w moczu od 1000 do 2000 U / l. Aktywność amylazy zwiększa się głównie w chorobach trzustki (w ostrym zapaleniu trzustki). Choroby gruczołów ślinowych i przewlekłe choroby nerek prowadzą do zwiększenia aktywności alfa-amylazy w surowicy.

Numer pracy 5. Wpływ adrenaliny na glukozę we krwi.

Postęp pracy. U królika, z żyły brzeżnej ucha lub u szczura z żyły ogonowej, pobiera się 0,1 ml krwi i określa się poziom glukozy we krwi metodą o-toluidynową.

Następnie zwierzę ma ścięte włosy na boku, pocierając skórę alkoholem i 0,1% roztworem adrenaliny pobiera się podskórnie z szybkością 0,1 ml na 1 kg wagi, a po 30 minutach ponownie mierzy się stężenie glukozy we krwi.

Numer pracy 6. Wpływ insuliny na poziom glukozy we krwi.

Postęp pracy. Od innego królika z żyły brzeżnej ucha lub od szczura z żyły ogonowej, weź 0,1 ml krwi i określ zawartość glukozy we krwi.

U zwierzęcia odetnij futro na boku, potraktuj alkoholem i wstrzyknij podskórnie insulinę w ilości 1,5 jednostki międzynarodowej na kg wagi. Godzinę później ponownie określ poziom glukozy we krwi. Wprowadzić zwierzę podskórnie 5% roztworem glukozy, aby zapobiec wstrząsowi insulinowemu: królik 10 ml, szczur - 1 ml.

Wyniki trzeciego i czwartego działają na stole i wyciągają wnioski.

Na podstawie materiałów www.ronl.ru

α - amylaza (diastaza, 1,4 - a - hydrolaza D - glukanowa, EC 3.2.1.1.) katalizuje hydrolizę wiązań α - 1,4 - glukozydowych skrobi, glikogenu i ich pokrewnych polisacharydów do maltozy, dekstryn i innych polimerów. Masa cząsteczkowa enzymu wynosi około 48 000 D. Cząsteczka zawiera atom wapnia, który nie tylko aktywuje enzym, ale także chroni go przed działaniem proteaz, a aktywność amylazy zwiększa się pod wpływem jonów chloru. We krwi jest ona reprezentowana przez dwa izoenzymy: trzustkowy - typ P i ślinowy - typ S, z których każdy jest podzielony na kilka frakcji. Izoenzym typu S wynosi na ogół 45–70% (średnio 57%), reszta jest typu P. Oba izoenzymy mają prawie identyczne właściwości katalityczne i immunologiczne, różnią się nieznacznie ruchliwością elektroforetyczną, ale są dobrze rozdzielone przez filtrację żelową na DEAE - Sephadex. Istnieje również makroamylaza, która nie jest wydalana przez nerki, ale można ją znaleźć w normalnej surowicy krwi (około 1% zdrowych osób) i patologii (2,5%).

Wysoka aktywność amylazy jest obserwowana w śliniance przyusznej i trzustce. Jednak jego aktywność, choć znacznie mniejsza, występuje w jelicie grubym i jelicie cienkim, mięśniach szkieletowych, wątrobie, nerkach, płucach, jajowodach, tkance tłuszczowej. We krwi enzym jest związany zarówno z białkami osocza, jak i z uformowanymi elementami. Aktywność enzymu jest taka sama dla mężczyzn i kobiet i nie zależy od charakteru spożywanego pokarmu i pory dnia.

Istniejące metody badania aktywności a-amylazy w płynach biologicznych są podzielone na dwie duże grupy:

1. Scukrzanie (reduktometryczne), oparte na badaniu cukrów powstających ze skrobi przez działanie redukujące glukozy i maltozy.

2. Amyloklastyczny, oparty na oznaczeniu pozostałości nierozszczepionej skrobi:

• w zależności od stopnia intensywności jego reakcji z jodem. Metody te są bardziej czułe i specyficzne, ale ich dokładność zależy w dużej mierze od jakości skrobi i optymalizacji warunków oznaczania.
• lepkość zawiesiny skrobi, nie mają wysokiej dokładności i nie są teraz stosowane.

3. Metody wykorzystujące substraty chromogenne –– opierają się na wykorzystaniu kompleksów substrat-barwnik, które pod wpływem α-amylazy rozpadają się tworząc rozpuszczalny w wodzie barwnik.

4. Metody oparte na sprzężonych reakcjach enzymatycznych:

Skrobia + H₂O maltozie + maltotriozie + dekstrynie

Maltoza + N₂Około 2 glukozy

Glukoza + ATP Glukoza - 6 - F + ATP

Glucose-6-F + NADF Gluconate-6-F + NADFN

Aktywność enzymu określa szybkość akumulacji NADPH.

Dwie metody amyloklastyczne zostały zatwierdzone jako ujednolicone: Karavey (z odpornym substratem skrobiowym) i Smith-Rohe.

α-Amylaza katalizuje hydrolizę nierozpuszczalnego barwnego substratu skrobiowego z wytworzeniem niebieskiego rozpuszczalnego w wodzie barwnika. Ilość uwolnionego barwnika jest proporcjonalna do aktywności katalitycznej enzymu.